2023年5月2日，接国家知识产权局通知，首都医科大学附属北京佑安医院任锋教授团队获批CRISPR技术在HBV cccDNA检测领域的第一项发明专利——“基于PCR-CRISPR-cas13a检测乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA的试剂盒”（图1）。

图1 “基于PCR-CRISPR-cas13a检测乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA的试剂盒”发明专利证书

HBV感染是影响全世界人民健康的主要公共卫生问题，有超过2.5亿的HBV感染者。主要的抗病毒药物如核苷（酸）类似物（NAs）和α干扰素（IFNα）等都不能完全治愈HBV，根本原因在于不能彻底清除的共价闭合环状DNA（cccDNA）。HBV cccDNA是病毒RNA复制转录的模板，它以微染色体的形式长期稳定的存在于肝细胞核中。因此，建立一种有效的HBV cccDNA检测方法，对于临床抗病毒治疗效果的评价和治疗策略的调整都具有重要意义。目前，检测HBV cccDNA的方法有Southern印迹杂交、巢式PCR、RCA和微滴数字PCR（ddPCR），但由于这些方法存在操作复杂、灵敏度低和成本较高等局限性没有被广泛使用。

规律成簇的间隔短回文重复序列及其相关蛋白（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats/CRISPR-associated proteins， CRISPR/Cas）是大多数细菌及古细菌中抵御病毒入侵的一种获得性免疫方式。CRISPR/Cas系统介导的免疫机理：当病毒首次入侵时，细菌会将病毒的小片段DNA整合到自身的CRISPR间隔区；当病毒再次入侵时，CRISPR转录生成一条前体CRISPR RNA（pre-crRNA），pre-crRNA被RNA内切酶切割生成含有与病毒靶标序列匹配的成熟CRISPR RNA（crRNA），该crRNA引导具有核酸内切酶活性的Cas蛋白对靶标序列进行识别和降解。基于CRISPR技术可实现快速、精确、便携式的核酸诊断，有望成为新一代核酸检测技术。

首都医科大学附属北京佑安医院任锋教授团队利用CRISPR新技术并联合PCR技术，建立了一种高灵敏性和高特异性检测HBV cccDNA的新方法，该方法的检测灵敏度为1copy/μl，优于目前现有的检测方法，针对肝组织进行检测，阳性符合率为72.5%，高于其他检测方法。这一方法的广泛应用将为HBV抗病毒治疗的评价和停药后再复发监测提供重要的指导意义。

这项工作得到了国家自然科学基金、北京市自然科学基金、首都卫生发展科研专项、北京市医院管理中心“登峰”人才培养计划及北京市医院管理中心“青苗”人才培养计划等资助。首都医科大学附属北京佑安医院为唯一专利权人，北京肝病研究所任锋教授、张向颖副教授、段钟平教授、陈德喜教授等为发明人。