3月27日至31日,第33届亚太肝病研究协会(Asian Pacific Association for the Study of the Liver,APASL)年会在日本京都隆重召开。来自亚太地区的专家学者欢聚一堂,分享在肝病领域的各项研究进展。北京佑安医院任锋教授团队的一项研究“CRISPR/Cas13a助力精准便携的丁型肝炎病毒RNA检测”入选大会口头报告,并获得Travel Award奖项。
丁型肝炎病毒(HDV)感染加速了慢性乙型肝炎病毒感染(HBV)的进展,给患者带来了巨大的经济和健康负担。目前,仍然缺乏准确和便携的HDV RNA的检测方法。因此,旨在利用CRISPR-Cas13a技术建立一种方便、快速、高灵敏度和特异性的方法来检测HDV RNA。
本研究首先从HDV数据库中下载了基因组序列,进行了多序列比对,并设计和筛选了CRISPR RNA(crRNA)、反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和反转录重组酶辅助扩增(RT-RAA)引物在保守序列区域结合。在使用热激活处理合成质粒和样本后,分别建立了基于CRISPR-Cas13a结合RT-PCR和RT-RAA的荧光和侧流条检测。临床血浆样本通过基于CRISPR-Cas13a的检测得到进一步验证。
研究结果表明,对于合成的HDV RNA质粒,基于RT-PCR-CRISPR的荧光检测的灵敏度为1拷贝/μL,高于反转录定量实时PCR(RT-qPCR)(10拷贝/μL)和反转录飞沫数字PCR(RT-ddPCR)(10拷贝/μL);对于HDV RNA阳性样本,基于RT-RAA-CRISPR的荧光和试纸条检测的灵敏度为10 copies/μL,与RT-qPCR和RT-ddPCR一样低,且检测时间仅约85分钟。此外,通过RT-qPCR、RT-ddPCR、RT-PCR-CRISPR荧光和RT-RAA-CRISPR试纸条方法检测的抗HDV IgG阳性样本的阳性率分别为66.7%(48/72)、76.4%(55/72)、81.9%(59/72)和72.2%(52/72)。
本研究开发了一种高灵敏度和特异性的RT-PCR-CRISPR检测方法以及一种基于RT-RAA-CRISPR的便携式简易检测方法,可作为一种监测HDV感染的发生发展和评价治疗效果的有效措施。
通过本次会议,任锋教授科研团队充分展示了课题组的最新研究成果,并通过此次发言增加了与国内外专家充分交流的机会。此外,通过此次盛会任锋教授科研团队也了解了肝病的最新研究动向,分享了目前肝病领域最新研究成果,学习了肝病领域最先进科研技术方法,这些都为该团队的科研发展起到了很好的指导作用。